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薄層色譜TLC操作流程

更新時間:2014-10-22      點(diǎn)擊次數(shù):3942
   

薄層色譜TLC的整個操作過程包括以下步驟:

1、薄層板的制備 制薄層板的主要原料是吸附劑和粘結(jié)劑
  吸附劑:zui常用于 TLC的吸附劑為硅膠 GF254; 硅膠HF254。

  粘結(jié)劑:一般用所羧甲基纖維素鈉(CMC),也有用淀粉的。CMC 為粉狀固體,用時先加水,水浴上熬成糊狀,配成1%水溶液。

  制板:(1)小板的制備:將硅膠加 1% CMC,調(diào)成槳狀(在平鋪玻璃板上能晃動但不能流動),將其涂在載玻片上( 75 X 25),為使其坦平,可將載玻片用手端平晃動,致坦平為止,放在干凈平坦的臺面上,晾干之后放入110℃烘箱活化1小時即可使用(一次可做很多塊)。

  2、點(diǎn)樣 點(diǎn)樣用的毛細(xì)管為內(nèi)徑< lmm的管口平整的毛細(xì)管,將樣品溶于低沸點(diǎn)的溶劑(乙醚、丙酮、乙醇、四氫呋喃等)配成1%溶液。

  點(diǎn)樣前,可先用鉛筆在小板上距一端5mm處輕輕劃一橫線,作為起始線,然后用毛細(xì)管吸取樣品在起始線上小心點(diǎn)樣,如需重復(fù)點(diǎn)樣,則應(yīng)待前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后方可重點(diǎn)。若在同一塊板上點(diǎn)幾個樣,樣品點(diǎn)間距離為5mm以上。

  3、展開 展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮。薄層的展開在密閉的容器中進(jìn)行。先將選擇的展開劑放入色譜器中(小板可用廣口瓶代替),使色譜器內(nèi)空氣飽和5-10min,再將點(diǎn)好試樣的薄層板放入色譜器中進(jìn)行展開,點(diǎn)樣的位置必須在展開劑液面之上,當(dāng)展開劑上升到薄層的前沿(離前端 5-10mm)或多組分已明顯分開時,取出薄層板放平晾干,用鉛筆劃溶劑前沿的位置后,即可顯色。

  4、顯色 如果化合物本身有顏色,就可直接觀察它的斑點(diǎn)。如果本身無色,可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點(diǎn)(有苯環(huán)的物質(zhì)都有),用鉛筆在薄層板上劃出斑點(diǎn)的位置;對于在紫外燈光下不顯色的,可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點(diǎn)(因?yàn)樵S多化合物都能和碘成黃棕色斑點(diǎn)),顯色后,立即用鉛筆標(biāo)出斑點(diǎn)的位置。

  5、用 TLC跟蹤有機(jī)反應(yīng) 在同一塊板上點(diǎn)上原料樣和反應(yīng)混合物樣(均需配成稀溶液),按上述方法進(jìn)行展開和顯色,記下原料樣的斑點(diǎn)位置和反應(yīng)混合物樣中相應(yīng)斑點(diǎn)的位置和大小。過一定時間后,再取反應(yīng)混合物樣液點(diǎn)樣、展開、顯色,如發(fā)現(xiàn)反應(yīng)混合液樣中相應(yīng)于原料斑點(diǎn)的位置處,無斑點(diǎn)或斑點(diǎn)變小,則說明反應(yīng)已經(jīng)完成或接近完成,所以依此可跟蹤有機(jī)化學(xué)反應(yīng)。這在有機(jī)合成上很有意義。

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