2025版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）正式頒布并于2025年10月1日開始實行，對于25版藥典中高效液相色譜方法參數(shù)調(diào)整允許范圍與20版有更詳細(xì)的要求，為了更好的執(zhí)行法規(guī)，下面我們對2025版《中國藥典》色譜參數(shù)允許調(diào)整表中每一項進(jìn)行分析解讀，并進(jìn)行了舉例說明，便于我們的理解執(zhí)行。

?? 原文：

不得改變填充劑的理化性質(zhì)如填充材質(zhì)，表面修飾及鍵合相需保持一致。

?? 說明：

填充材質(zhì)包含基質(zhì)，比如硅膠基質(zhì)，聚合物基質(zhì)。

?? 原文：

改變色譜柱填充劑粒徑和柱長后，L/dp值應(yīng)保持不變或在原規(guī)定值的-25%~+50%范圍內(nèi)。

?? 說明：

例如：原色譜柱規(guī)格：4.6×250，5 μm。

?? 要求：

分別替換為3 μm和5 μm粒徑，計算其合規(guī)的柱長范圍。

?? 計算如下：

原色譜柱的L/dp值為：250/5=50

則可更換成L/dp為：50×0.75~50×1.5=37.5~75

?? 原文：

在滿足等度或梯度洗脫要求[如為等度洗脫，當(dāng)理論板數(shù)(n)在原色譜柱的-25%~+50%范圍內(nèi);如為梯度洗脫，當(dāng)所有色譜峰(t_R/W_h/2)²值在原色譜柱的-25%~+50%范圍內(nèi)]時可以調(diào)整，且可使用L和dp的其他組合。前提是應(yīng)滿足系統(tǒng)適用性要求，且已知成分的選擇性和出峰順序不變。

?? 說明：

例如：原色譜柱規(guī)格：4.6×250mm，5μm等度條件和梯度條件下理論塔板數(shù)是20000。

?? 要求：

分別替換為2.7μm粒徑，計算其在等度和梯度下合規(guī)的柱長范圍。

?? 原文：

在填料粒徑和/或柱長沒有變化的情況下，可以調(diào)整柱內(nèi)徑。為避免柱內(nèi)徑減小可能引起的柱外譜帶展寬，應(yīng)減小儀器連接死體積、進(jìn)樣量或檢測池的體積，適當(dāng)增加采集速率。

?? 說明：

建議柱內(nèi)徑≤2.1mm關(guān)注設(shè)備死體積，包含樣品流經(jīng)的全部管路，內(nèi)徑使用≤0.12mm和長度盡可能的短，檢測器使用半微量流通池，工作站采集頻率根據(jù)峰寬進(jìn)行調(diào)整，如果出現(xiàn)譜圖出峰早的峰形異常（拖尾，前沿，峰分叉等）出峰晚的峰形越來越對稱，可以判斷為是柱外死體積太大導(dǎo)致，進(jìn)行設(shè)備的優(yōu)化。

?? 原文：

等度洗脫時，在柱尺寸未改變時，允許流速調(diào)整士50%。當(dāng)柱內(nèi)徑和粒徑改變時，按下式計算并調(diào)整流速：

柱尺寸的變化作上述調(diào)整后，允許流速額外變化±50%，梯度洗脫時，當(dāng)柱內(nèi)徑和粒徑改變時，按下式計算并調(diào)整流速。

?? 說明：

該參數(shù)調(diào)整與粒徑不相關(guān)，如果條件中沒有規(guī)定流速，可以根據(jù)項目情況選擇合適的流速，如：內(nèi)徑4.6mm柱使用1ml/min；4mm柱使用0.8ml/min，如果標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了流速則流速的調(diào)整需按以下要求來調(diào)：原色譜柱使用4.6×250mm ,5μm 流速是1ml/min，分別計算

1、柱子不改變時的流速范圍；

2、等度條件下色譜柱更換成3×250mm ,3μm時的流速在多少；

3、梯度條件下色譜柱更換成3×250mm,3μm時的流速在多少。

根據(jù)公式分別帶入新色譜柱的內(nèi)徑和粒徑得如下：

?? 原文：

即便色譜柱尺寸沒有調(diào)整，也可調(diào)整進(jìn)樣體積以滿足系統(tǒng)適用性的要求，上述體積調(diào)整公式可能不適用于表面多孔(SPP)柱替代全多孔(TPP)柱。

?? 說明：

該參數(shù)調(diào)整與粒徑不相關(guān)，色譜柱規(guī)格未調(diào)整時也可以調(diào)整進(jìn)樣體積，但沒有給出范圍，前提是滿足系統(tǒng)適用性要求，同時不能因為進(jìn)樣體積改變而導(dǎo)致低響應(yīng)物質(zhì)未檢出。

例如：原色譜柱使用4.6×250mm ,5μm 進(jìn)樣體積20μl，更換成色譜柱3.0×150mm ,3μm時進(jìn)樣體積根據(jù)公式計算是：5.1μl，方便操作選擇5μl。

?? 原文：

占比小的流動相組分比例可在相對值±30%進(jìn)行調(diào)整，但任何組分比例的變化不能超過絕對值±10%。占比小的流動相組分是指小于或等于(100/n)%比例的組分，n為流動相中含有的組分?jǐn)?shù)。

?? 說明：

需要同時滿足兩個條件，小比例的相對值±30%及任何組分比例變化絕對值的±10%。

例如：甲醇-水 = 70:30的調(diào)整范圍計算

已知條件：流動相組成是甲醇 : 水 = 70 : 30

組分?jǐn)?shù) n=2  100/n=100/2=50% 

占比小的組分：水（30%）

最終允許范圍：

甲醇 : 水 = 61:39 ～ 79:21

?? 原文：

滿足以下條件的情況下，可對流動相的比例和梯度洗脫程序進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整:

(1)滿足系統(tǒng)適用性要求;

(2)出峰順序不變，分離度和靈敏度滿足要求;

(3)流動相的組成和梯度洗脫程序應(yīng)使第一個峰被充分保留，最后一個峰被wan全洗脫。

各梯度段梯度時間的調(diào)整詳見后文。

?? 說明：

梯度洗脫條件的調(diào)整可分步進(jìn)行:

(1)根據(jù)L/dp調(diào)整柱長和粒徑;

(2)根據(jù)粒徑大小和柱內(nèi)徑的變化調(diào)整流速;

(3)根據(jù)柱長、柱內(nèi)徑和流速的變化，調(diào)整每個梯度段的梯度時間。藥典中描述相對“模糊"需要在實際分析中謹(jǐn)慎對待并根據(jù)具體情況做適合調(diào)整。

?? 原文：

等度洗脫:除另有規(guī)定外，在原規(guī)定溫度的±10 ℃范圍內(nèi)調(diào)整

梯度洗脫:除另有規(guī)定外，在原規(guī)定溫度的±5 ℃范圍內(nèi)調(diào)整

?? 說明：

如果標(biāo)準(zhǔn)中未規(guī)定柱溫，可以根據(jù)我們的操作習(xí)慣硅膠基質(zhì)色譜柱設(shè)定30℃，聚合物基質(zhì)色譜柱根據(jù)應(yīng)用環(huán)境會稍高，氨基柱測定糖類設(shè)定40-45℃。

若標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定柱溫為30 ℃，那么等度洗脫可變化范圍為20-40 ℃，梯度洗脫可變化范圍為25-35 ℃。

?? 原文：

原規(guī)定值±10%范圍內(nèi)調(diào)整。

?? 說明：

如果方法中的鹽濃度為0.05 mol/L，調(diào)整范圍是0.045 mol/L-0.055 mol/L，調(diào)整時需關(guān)注更高濃度時與有機相是否有溶解性挑戰(zhàn)。

?? 原文：

除另有規(guī)定外，流動相中水相pH值在原規(guī)定值±0.2 pH范圍內(nèi)調(diào)整。

?? 說明：

如果方法中規(guī)定了pH調(diào)整范圍則按照方法執(zhí)行，反之則使用該規(guī)定，比如：方法中的pH值為2.5，則可以在2.3-2.7的范圍內(nèi)進(jìn)行。

?? 原文：

不允許改變。

?? 說明：

檢測器類型和檢測波長均不能做改變。